Es wurde eine Methode entwickelt, die auf der Detektion charakteristischer Peptide basiert, um Allergenproteine in Garnelenprodukten mittels Trypsinverdau / Hochleistungsflüssigchromatographie - Quadrupol-Flugzeit-Massenspektrometrie nachzuweisen. 700 μL 6 mol/L Guanidinhydrochlorid und 700 μL 50 mmol/L Tris-HCl-Puffer wurden jeweils als Denaturierungsmittel für Proteine verwendet. Durch Optimierung der Verdauzeit und charakteristischer Peptide wurde festgestellt, dass 50 mmol/L Dithiothreitol und 100 mmol/L Iodoacetamid verwendet werden, um Disulfidbrücken zu zerstören und deren Bildung zu hemmen. Anschließend erfolgte der Trypsinverdau mit 10 mg/mL in 100 μL 500 mmol/L Natriumbicarbonat in schwach basischem Umfeld. Als mobile Phase wurden Acetonitril und 0,1 % Ameisensäure in Wasser verwendet, getrennt auf einer Caprisil C₁₈-X-Säule (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μm). Die Ionisierung erfolgte im positiven Ionmodus mit einer Dual AJS ESI-Elektrospray-Quelle; die Datenerfassung erfolgte mittels Auto MS/MS mit iterativer Ionenausschlussmethode an einem Quadrupol-Flugzeit-Massenspektrometer. Basierend auf den Peptidspitzen wurde IQLLEEDLER als charakteristisches Peptid von Myosin ausgewählt und mittels externer Kalibrierung quantifiziert. Die Ergebnisse zeigten eine gute lineare Beziehung innerhalb des linearen Bereichs mit einem Korrelationskoeffizienten (r²) von 0,9920, einem Nachweislimit von 0,68 μg/L, einem Quantifikationslimit von 2,28 μg/L sowie Rückgewinnungsraten von 84,5 % bis 101 % bei Anreicherungsstufen von 2 und 10 mg/kg. Die Methode zeichnet sich durch einfache Probenvorbereitung, hohe Empfindlichkeit, gute Reproduzierbarkeit und präzise qualitative sowie quantitative Bestimmung aus. Sie kann technische Unterstützung bei der Prüfung und Identifizierung von Garnelenallergenen bieten und dient als methodische Referenz für die Identifikation von tierischen Inhaltsstoffen basierend auf charakteristischen Peptiden von Proteinen.

Trypsinverdau; Hochleistungsflüssigchromatographie - Quadrupol-Flugzeit-Massenspektrometrie; Garnelenprodukte; Allergenproteine; charakteristische Peptide