Edwardsiella tarda, ein langsamer Krankheitserreger in der Aquakultur, ist ein bedeutender pathogener Erreger. Schnelle, effiziente und vor Ort anwendbare Nachweismethoden können das Auftreten von Krankheiten effektiv verhindern und kontrollieren. In dieser Arbeit werden Rolling Circle Amplification (RCA) und chromatographische Teststreifen (LFS) kombiniert, wobei Latex-Mikrokugeln als Markierungen verwendet werden, um eine neue RCA-LFS-Methode zur Detektion von Edwardsiella tarda zu etablieren. Basierend auf dem gyrb-Gen des Erregers wurden Locksonden und passende Amplifikationsprimer entworfen. Die optimierten RCA-Bedingungen sind wie folgt: Locksondenk Konzentration 500 pmol/L, Amplifikationstemperatur 61 ℃, Amplikationszeit 50 Minuten. Nach der Amplifikation wird der Teststreifen direkt in die Amplifikationsproduktlösung eingetaucht und die Ergebnisse mit bloßem Auge abgelesen. Die Methode besitzt eine hohe Spezifität, zeigt keine Kreuzreaktion mit anderen häufigen Krankheitserregern, die Nachweisgrenze für genomische DNA von Edwardsiella tarda liegt bei 50 ng/mL. Im Vergleich zu gängigen kolloidalen Goldmarkern sind Latexmikrokugeln stabiler und farblich vielfältiger und könnten eine gleichzeitige Detektion mehrerer Bakterien allein durch Farbwechsel ermöglichen. Die RCA-LFS-Methode wurde zur Untersuchung infizierter japanischer Aalproben eingesetzt, die Ergebnisse stimmen mit den konventionellen Gelelektrophorese-Resultaten überein, die Methode ist jedoch einfacher, schneller und leichter auszuwerten. Die RCA-LFS fördert die Vor-Ort-Erkennung von pathogenen Bakterien erheblich.

Rolling-Circle-Amplifikation;Edwardsiella tarda;Locksonde;Latexmikrokugeln;chromatographische Teststreifen