Es wurde eine Vor-Kolonnen-Derivatisierungs- / Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-Fluoreszenzdetektionsmethode für 13 Arten von acetylsulfatierter Heparansulfat (HS)-Disacchariden in PANC-1- und CFPAC-1-Zelltumor-Mäusen des Pankreaskarzinoms etabliert. Die Pankreaskarzinomtumorproben wurden durch Entfettung, Proteasenverdauung und weitere Vorbehandlungen gewonnen, um HS-Disaccharide zu erhalten, die mit dem Derivatisierungsreagenz 2-Aminoacridon (AMAC) reagierten. Die Trennung erfolgte an einer Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C18-Säule mit einem Gradientenelutionssystem aus Methanol und 60 mmol/L Ammoniumacetat (pH 5,6), wobei bei einer Anregungswellenlänge von 425 nm und einer Emissionswellenlänge von 520 nm detektiert wurde. Die Ergebnisse zeigten für 13 HS-Disaccharide eine gute lineare Beziehung innerhalb ihrer jeweiligen Konzentrationsbereiche (r2≥0,9990), die Nachweisgrenze (LOD) lag bei 0,012–0,313 µg/mL, die Bestimmungsgrenze (LOQ) bei 0,117–1,250 µg/mL. Die Präzision, dargestellt durch die relative Standardabweichung (RSD), lag zwischen 0,040 % und 0,63 %, die Tages- und Intratagesstabilität wies RSD-Werte von 0,34 %–3,6 % bzw. 1,8 %–6,4 % auf, die Wiederfindungsrate lag zwischen 80,7 % und 109 % mit RSD-Werten von 0,50 %–17 %. In den Tumorgeweben von Mäusen mit zwei Arten von Pankreaskarzinom-Zelllinien wurden 9 HS-Disaccharide nachgewiesen, wobei ΔUA-GlcN (ⅣH) mit 28.627,558 nmol/g und 66.938,786 nmol/g den höchsten Anteil ausmachte, gefolgt von ΔUA-GlcNAc (ⅣA) und ΔUA-GlcN, 6S (ⅡH). Molekulare Docking-Ergebnisse zeigten, dass ⅣH die stärkste Bindung an den heparinbindenden epidermalen Wachstumsfaktor (HB-EGF) aufweist, während ⅡH die stärkste Bindung an den Fibroblasten-Wachstumsfaktor-2 (FGF-2) besitzt. Die Eigenschaften der HS-Sulfatierungssequenzen und deren Interaktionen mit HB-EGF und FGF-2 regulieren die Entstehung und Entwicklung des Pankreaskarzinoms. Die Ergebnisse der Studie können bei der frühzeitigen Behandlung und Diagnose von Pankreaskarzinomen helfen.

Pankreaskrebs; Acetylsulfatiertes Heparansulfat; Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie mit Fluoreszenzdetektion; Vor-Kolonnen-Derivatisierung