Eine Methode zur Analyse der Verteilung von Natriumsalzen von Oligonukleotiden mittels Matrix-unterstützter Laser-Desorption/Ionisation-Flugzeit-Massenspektrometrie (MALDI-TOF MS) wurde entwickelt. Einsträngige Oligonukleotid-Primerproben (Länge 20 bp, theoretisches Molekulargewicht 6.071,02 Da) wurden nach Auflösung in reinem Wasser mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (HPLC-MS) und MALDI-TOF MS untersucht; die Proben wurden nach Zugabe von Natriumacetat, Alkohol-Fällung und Rekonstitution erneut mit HPLC-MS und MALDI-TOF MS im Positivionenmodus getestet. Vor und nach Zugabe von Natrium zeigte HPLC-MS nach Dekonvolution jeweils nur eine einzelne Komponente ohne Salz (entsprechende Molekulargewichte 6.069,9 Da bzw. 6.069,8 Da); MALDI-TOF MS zeigte für die Probe ohne Salz eine einzelne Komponente (Molekulargewicht 6.071,09 Da), während die Probe nach Zugabe von Salz eine Verteilung der Komponenten mit unterschiedlicher Anzahl an Natriumionen zeigte: Die Komponenten begannen mit dem unveränderten Molekül ohne Natrium (ca. 6.071 Da), der Gehalt nahm zunächst zu und dann wieder ab, die Anzahl der zugegebenen Natriumionen variierte je nach Salzbedingungen von 0~4 bis 0~19. Das Ergebnis zeigt die Fähigkeit von MALDI-TOF MS, die Verteilung von Natriumsalzkomponenten von Oligonukleotiden zu detektieren, sowie seine breite Anpassungsfähigkeit und Sensitivität für eine Reihe von Oligonukleotidmolekülen mit unterschiedlichem Salzgrad. Am Beispiel des Antisense-Oligonukleotid-Medikaments Fomivirsen-Natrium wurden mittels MALDI-TOF MS das reine Arzneimittel sowie ein Tierinjektionsmodell mit Polyethylenglykol und Tween als Hilfsstoffen untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass die Hauptform von Fomivirsen-Natrium Natrium von 0 bis 3 enthält, mit einem insgesamt abnehmenden Gehalt und ohne Änderung vor und nach der Matrixzugabe; die Abweichung der Fomivirsen-Komponenten lag im Bereich von ±0,5 Da, die Genauigkeit wurde nicht durch die Matrix beeinflusst. Darüber hinaus wurden mehrere andere Komponenten in der Matrix (einschließlich Polyethylenglykol 300 und Tween-80) unabhängig im Massenspektrum dargestellt, ohne die Fomivirsen-Komponenten zu stören. Die Methode ist einfach, schnell und sensitiv, geeignet für die qualitative Identifikation der Verteilung von Natriumsalzen von Oligonukleotiden und wird bei der Analyse von realen Arzneimitteln nicht durch die Arzneimittelmatrix beeinflusst. Dies ist von großer Bedeutung für die Entwicklung und Prüfung von Antisense-Oligonukleotid-(ASO)-Medikamenten.

MALDI-TOF MS;Oligonukleotide;Verteilung von Natriumsalzen von Oligonukleotiden;Qualitative Analyse