تقدم هذه الدراسة طريقة تحليل نظائر مستقرة ثنائية الأبعاد بهدف إنشاء تقنية تحليل نظائر الكربون والكلور الفردية لثلاثي (2-كلوروإيثيل) فوسفات الإستر (TCEP)، للكشف عن آلية التحول الميكروبية اللاهوائية له. تم تحقيق معدل استرداد عالي (96.3٪) وتدخل منخفض من المصفوفة من خلال تحسين عملية الاستخراج والتنقية، ولم تتجاوز قيم δ¹³C لـ TCEP في العينات المعالجة قبل التحليل باستخدام مطياف الكتلة مع النسبة النظيرية المرتبطة بالكروماتوغرافيا الغازية (GC-IRMS) الفرق عن المعيار 0.5‰. تم إنشاء طريقة تحليل نظائر الكلور الفردية لـ TCEP باستخدام كروماتوغرافيا الغاز-جهاز مطياف الكتلة الرباعية القطبية (GC-qMS). من خلال تحسين شروط التحليل، تم تحديد أفضل نسبة إشارة إلى ضجيج عند تركيز عينة 5 ملغم/لتر، ووقت احتجاز 50 مللي ثانية، وجهد مصدر الأيون 300 فولت، بإنحراف معياري لنسبة نظائر الكلور بين 0.00011 و0.00028. تم تطبيق الطريقة المنشأة على نظام التحول اللاهوائي لـ TCEP، حيث لوحظ فصل واضح لنظائر الكربون والكلور، مما يشير إلى أن كسر رابطة C—Cl هو خطوة الحد من سرعة التحول. توفر هذه الطريقة دعماً تقنياً موثوقاً لاستكشاف آليات التحول والسلوك البيئي للفوسفات العضوي المكلور.