منصة استشعار كهربائية بناءً على شيفرة الحمض النووي واستراتيجية تضخيم الإشارة بالتكرار الحلقي لبروتين كيناز A

YANG Qing-di ,  

LI Rong ,  

YANG Jin-ju ,  

ZHANG Yan-li ,  

MEN Xue ,  

WANG Hong-bin ,  

YANG Wen-rong ,  

PANG Peng-fei ,  

摘要

تلعب بروتين كيناز A (PKA) دورًا مهمًا في العديد من العمليات البيولوجية، حيث تنظم إشارة الخلايا وتكاثرها وتمايزها وموتها المبرمج، وبالتالي فإن مراقبة وتثبيط نشاط PKA ذو أهمية كبيرة في التشخيص الطبي واكتشاف الأدوية. تعتمد هذه الورقة على استخدام شيفرة الحمض النووي (DNA barcode) واستراتيجية تضخيم الإشارة بالتكرار الحلقي (RCA) لبناء منصة استشعار كهربائية كيميائية لتحليل نشاط PKA وفرز مثبطاته. تم استخدام مركب من أقفاص الذهب النانوية/ثنائي كبريتيد الموليبدينوم (AuNCs/MoS2) كمواد تعديل للإلكترود، وتم تجميع سلاسل الببتيد الفرعية ذات صلة على سطح الإلكترود المعدل (AuNCs/MoS2/GCE) عبر رابطة الذهب-الكبريت، حيث تحدث الفسفرة النهائية تحت تحفيز PKA، مما يؤدي إلى ارتباط عالي التخصص وجزيء مع جسيمات الذهب النانوية الموسومة بشيفرة الحمض النووي (DNA barcode-AuNPs). تحت عمل إنزيم الربط T4 DNA ligase، تتزاوج سلاسل DNA من جسيمات الذهب النانوية مع قالب DNA الدائري لتشكيل مسبار قفل. مع إضافة بوليميراز DNA phi29 وdNTP، يتم تحفيز تفاعل التضخيم بالتكرار الحلقي (RCA). يصنع الناتج من RCA مركبًا مفاعلًا يحاكي إنزيم الهيمين (Hemin) مع نشاط تحفيز رباعي السلاسل G، مما يحقق تضخيم الإشارة الكهربائية وتحليل نشاط PKA. نطاق الاستجابة الخطي لهذا النظام لتحليل نشاط PKA هو 0.005~100 وحدة/مل، مع حد كشف (LOD) يبلغ 1 مللي وحدة/مل. يمكن استخدام هذه الطريقة في فرز مثبطات PKA وتحليل نشاط PKA في مستخلصات خلايا سرطان الثدي البشري (MCF-7) وخلايا سرطان الكبد (HepG-2)، مما يوفر طريقة جديدة لتحليل نشاط كينازات.

关键词

شيفرة الحمض النووي;تضخيم التكرار الحلقي;بروتين كيناز;فسفرة;مستشعر كهربائي كيميائي

阅读全文

以上内容由讯飞翻译自动生成，翻译内容仅供参考。对于因使用本网站翻译内容产生的相关后果，本网站不承担任何商业和法律责任。

The above content is generated by Large Model Translation. The translated content is for reference only. We do not assume any commercial or legal responsibilty for any consequences arising from the use of our website