تم بناء طريقة للكشف المعزز بالتكامل بين تفاعل تضخيم استبدال السلسلة المتساوي الحرارة للنيوكلييك أسيد (ISDA) ونظام CRISPR-Cas12a للكشف عن microRNA-31 (miRNA-31) باستخدام شريط اختبار معزز بالفلور العكسي (rLFTS) كنظام عرض إشارة لتحقيق الكشف المرئي. من خلال تحسين تصميم بادئات تفاعل ISDA ووسيط التفاعل، تم التمييز بنجاح بين miRNA-31 وتحقيق التكبير الأولي للإشارة، حيث يتم إنتاج الحمض النووي مزدوج السلسلة وتنشيط النشاط القطعي المعاكس لنظام CRISPR-Cas12a على جزيئات الحمض النووي أحادي السلسلة الحرة (ssDNA) التي تعمل كجزيئات تقرير، كما يتم تثبيط روابط جسيمات الذهب النانوية عن طريق تكوين هياكل شطيرة مع مسبار Cy5 الفلوري على خط الكشف عبر ارتباط ssDNA، مما يعيد تنشيط فلوريسين Cy5، وبالتالي يتم الحصول على إشارة كمية للكشف عالي الحساسية والنوعية لـ miRNA-31. يبلغ حد كشف الطريقة في عينات اللعاب 57.9 amol/L، مع معدل استرداد 91.6% إلى 111%، وتتماشى نتائج الكشف جيدًا مع نتائج التفاعل التسلسلي العكسي الكمي (qRT-PCR)، ويستغرق الكشف 90 دقيقة فقط. تظهر النتائج التجريبية أن الطريقة تتميز بسهولة التشغيل، وحساسية عالية، وزمن كشف قصير، مما يلبي متطلبات الكشف الفائق الحساسية لـ miRNA-31 في عينات اللعاب.

تفاعل تضخيم استبدال السلسلة المتساوي الحرارة;CRISPR-Cas12a;شريط اختبار معزز بالفلور العكسي;MiRNA-31;الكشف عن الأحماض النووية