تم إنشاء طريقة تحلل إنزيم التربسين / كروماتوغرافيا سائلة فعالة عالية - مطياف الكتلة رباعي القطبية - وقت الرحلة للكشف عن بروتينات مسببة للحساسية في منتجات الروبيان استنادًا إلى ببتيدات مميزة. تم استخدام 700 ميكرولتر من غوانيدين هيدروكلوريد 6 مول/لتر و700 ميكرولتر من مخزن ثلاثي هيدروكسيميثيل أمينوميثان-هيدروكلوريد (Tris-HCl) 50 ملليمول/لتر كمستحضرات نزع طي البروتينات، ومن خلال تحسين وقت التحلل الإنزيمي والببتيدات المميزة، تم تحديد استخدام 50 ملليمول/لتر من ديسلفات ثايوغليكولات و100 ملليمول/لتر من يودوأسيتاميد لتدمير ومنع تشكيل روابط ثاني الكبريتيد، وبعد ذلك تم تحلل إنزيم التربسين بتركيز 10 ملغم/مل في بيئة قلوية ضعيفة تحتوي على 100 ميكرولتر من بيكربونات الصوديوم 500 ملليمول/لتر. تم استخدام مرحلة متنقلة من الأسيتونتريل ومحلول مائي من حمض الفورميك 0.1%، وفصل باستخدام عمود كروماتوغرافيا Caprisil C18-X (100 مم × 2.1 مم، 1.8 ميكرومتر). تم التأين بوضع الأيون الموجب باستخدام مصدر أيوني مزدوج AJS (Dual AJS ESI)، وتم جمع العينات باستخدام طريقة استبعاد أيون التكرار التلقائي (Auto MS/MS) باستخدام مطياف الكتلة رباعي القطبية - وقت الرحلة. استنادًا إلى نتائج قمة الببتيدات، تم اختيار IQLLEEDLER كببتيد مميز للأكتينين، وتم التكميم باستخدام طريقة العلامة الخارجية. أظهرت النتائج أن الببتيد المميز المختار يتمتع بعلاقة خطية جيدة ضمن نطاق خطي مع معامل ارتباط (r²) قيمته 0.9920، والحد الأدنى للكشف 0.68 ميكروغرام/لتر، وحد الكمية 2.28 ميكروغرام/لتر، ونسبة الاسترداد للعينات عند مستويات الإضافة 2 و 10 ملغم/كغ تتراوح بين 84.5% إلى 101%. تتميز هذه الطريقة بتحضير بسيط، وحساسية عالية، وتكرار جيد، ودقة نوعية وكمية، ويمكن أن توفر الدعم التقني لاختبار وتحديد مسببات حساسية الروبيان، بالإضافة إلى توفير مرجع منهجي لتحديد مكونات مستمدة من الحيوانات استنادًا إلى ببتيدات مميزة للبروتينات.

تحلل إنزيم التربسين; كروماتوغرافيا سائلة فعالة عالية - رباعي القطبية - وقت الرحلة; منتجات الروبيان; بروتينات مسببة للحساسية; ببتيدات مميزة