دراسة تحضير وسط كروماتوغرافي تعاملي معدني مسامي كبير بحجم التأشيب وأداء فصل البروتين

HOU Heng-yang ,  

LI Zi-yang ,  

QIAO Juan ,  

MA Lei ,  

JIN Hai-bo ,  

ZHANG Rong-yue ,  

摘要

تعتمد هذه الورقة على كريات بولي أكريلات مسامية كبيرة الحجم كقاعدة، وأحادية الوظائف ميثيل ميثاكريلات جليسرول إيثلين ديامين (GMA-IDA) كمُركب وظيفي، وتم تحضير وسط كروماتوغرافي تعاملي معدني من خلال تفاعل أكسدة واختزال. أولاً، يتم تحضير أحادي الوظائف GMA-IDA عبر التفاعل بين مجموعات الإيبوكسيد لـ GMA مع إيمينويدية IDA، ثم يتم إجراء تفاعل تأشيب التماثل في المونومر الوظيفي عبر تفاعل أكسدة واختزال لتشكيل كريات بوليمر مسامية. وأخيرًا، يتم تشبيك Ni2+ في محلول نيكل بتركيز 0.1 مول/لتر، لإنتاج وسط كروماتوغرافي تعاملي FastSep-GMA-IDA-Ni. تم دراسة تأثير عوامل تفاعل التأشيب على سعة امتصاص البروتين، بما في ذلك تركيز الأحادي الوظيفي، تركيز المُحفز، قيمة pH النظام التفاعلي، درجة الحرارة، والوقت، حيث تم تحديد أفضل شروط تحضير لوسط FastSep-GMA-IDA-Ni. باستخدام هيموغلوبين البقر كنموذج للبروتين، بلغت سعة الربط الساكنة لأوسط FastSep-GMA-IDA-Ni أقصى قيمة تصل إلى 47.97 ملغم/مل، أي أعلى بحوالي 25.75% من وسط النيكل التجاري. في المقابل، كان لوسط FastSep-IDA-Ni المحضر بطريقة الاقتران سعة ربط ساكنة تبلغ 12.518 ملغم/مل، وهو أقل بكثير من وسط FastSep-GMA-IDA-Ni المحضر بطريقة التأشيب. وأظهر FastSep-GMA-IDA-Ni كفاءة نقل بروتين أفضل مقارنة بالوسط التجاري. أظهرت الدراسة أنه مع زيادة محتوى النيكل، زادت سعة الربط الساكنة للبروتين في وسط FastSep-GMA-IDA-Ni تحت نفس الشروط حتى وصلت إلى التشبع. وأظهرت النتائج أنه مع زيادة سعة تبادل الأيونات، زاد محتوى النيكل المتشابك، حيث بلغ أعلى محتوى نيكل 104.06 ميكرومول/مل. وتم استخدام FastSep-GMA-IDA-Ni المحضر لفصل وتنقية بروتين الهيماغلوتينين (HA-His) المعبر عنه بواسطة خلايا CHO، وحصل على نتائج فصل جيدة.

关键词

وسط كروماتوغرافي تعاملي معدني;طريقة التأشيب;كريات بوليمر;سعة ربط البروتين;فصل وتنقية

阅读全文