طريقة الاستخلاص ما قبل العمود / الكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء مع الكشف بالفلوريسنس لقياس 13 نوعًا من ثنائي الهيباران الكبريتات الأسيتيلية في فئران محملة بأورام خلايا سرطان البنكرياس PANC-1 و CFPAC-1
تم إنشاء طريقة الكشف عن 13 نوعًا من ثنائي السكاريد الهيباران الكبريتات الأسيتيلية (HS) باستخدام طريقة الاستخلاص ما قبل العمود / الكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء مع الكشف بالفلوريسنس في فئران محملة بأورام خلايا سرطان البنكرياس PANC-1 و CFPAC-1. تم الحصول على ثنائي HS من عينات أورام سرطان البنكرياس التي خضعت لمعالجة تمهيدية تشمل إزالة الدهون والتحلل المائي بالبروتياز، ثم تفاعل مع كاشف مشتق 2-أمينو أكريدون (AMAC). تم الفصل باستخدام عمود Thermo Scientific HYRERSIL ODS-2C18 على مراحل مع مرور متدرج للميثانول / 60 ممول / لتر أسيتات الأمونيوم (pH 5.6)، وتم الكشف عند طول موجي تحفيز 425 نانومتر وطول موجي انبعاث 520 نانومتر. أظهرت النتائج أن 13 نوعًا من ثنائي HS أظهرت علاقة خطية جيدة ضمن نطاق تركيز كل منها (r2≥0.999 0)، وحد الكشف (LOD) كان بين 0.012 و0.313 ميكروغرام / مل، وحد الكمية الأدنى (LOQ) بين 0.117 و1.250 ميكروغرام / مل. كان متوسط الانحراف المعياري النسبي (RSD) للدقة بين 0.040٪ و0.63٪، والاستقرار داخل اليوم RSD بين 0.34٪ و3.6٪، والاستقرار بين الأيام RSD بين 1.8٪ و6.4٪، ونسبة الاسترداد المضافة بين 80.7٪ و109٪ مع RSD بين 0.50٪ و17٪. تم اكتشاف 9 أنواع من ثنائي HS في أنسجة أورام فئران محملة بأورام خليتين من سرطان البنكرياس، حيث كان ΔUA-GlcN (ⅣH) عالي النسبة بواقع 28627.558 نانومول / جرام و66938.786 نانومول / جرام، تبعها ΔUA-GlcNAc (ⅣA) وΔUA-GlcN، 6S (ⅡH). أظهرت نتائج الاقتران الجزيئي أن ⅣH لديه أقوى ارتباط مع عامل النمو البطاني المرتبط بالهيبارين (HB-EGF)، وⅡH لديه أقوى ارتباط مع عامل نمو الألياف 2 (FGF-2). تشير خصائص تسلسل كبريتات HS والتفاعلات بين HB-EGF وFGF-2 إلى تنظيم تطور سرطان البنكرياس ونموه. يمكن أن تساعد نتائج هذه الدراسة في التشخيص والعلاج المبكر لسرطان البنكرياس.
关键词
سرطان البنكرياس؛ الهيباران الكبريتات الأسيتيلية؛ طريقة الكروماتوجرافيا السائلة عالية الأداء مع الكشف بالفلوريسنس؛ الاستخلاص ما قبل العمود