设计并合成了核因子NF-κB的特异结合DNA序列探针

在其5端巯基化修饰后固定在基频10 MHz的石英晶体金膜表面

构建压电DNA-蛋白质相互作用生物传感器

研究了传感器的响应特性及NF-κB的p65蛋白亚基与其特异DNA结合的亲和常数Ka。DNA探针浓度在0.25

2

.0μmol/L范围内

随着探针浓度的增加

传感器的响应频率逐渐增大

当探针浓度超过2.0μmol/L时

传感器的响应频率反而降低;反应缓冲液镁离子浓度、pH对p65蛋白亚基与其特异DNA结合有影响

当MgCl2浓度为50 mmol/L、pH7.5时

p65蛋白亚基与其特异DNA结合引起的传感器响应频率最大;在p65质量浓度为10

4

0 mg/L时

结合反应引起的频率变化与p65质量浓度呈线性相关

检测批内相对标准偏差(RSD)小于5%

批间RSD小于10%

最大结合量和结合常数Ka分别为(49.6±1.5)ng和(3.92±0.14)×106L.mol-1。构建的压电DNA-蛋白质相互作用生物传感器具有结构简单、操作方便、不需标记、实时检测等优点

可直接用于核因子NF-κB与DNA的相互作用研究。